Prenos energije fluorescentne rezonance (FRET)
Prenos energije fluorescentne rezonancije (FRET) je proces prijenosa energije bez zračenja u kojem se energija pobuđenog stanja donora prenosi u pobuđeno stanje akceptora kroz interakciju međumolekularnih električnih parova.Ovaj proces ne uključuje fotone i stoga nije radiativan.Ovaj test ima prednosti što je brz, osjetljiv i jednostavan.
Boja koja se koristi u FRET testu može biti identična.Ali u većini aplikacija zapravo se koriste različite boje.Ukratko, prijenos energije svjetlosne rezonancije je prijenos para dipola sa donora (boja 1) na akceptor (boja 2) kada je grupa donora pobuđena.Općenito, emisioni spektar grupe Donor fluorofora se preklapa sa spektrom apsorpcije grupe Acceptor.“Kada je udaljenost između dva fluorofora odgovarajuća (10-100 A), može se uočiti prijenos energije fluorofora od donora do akceptora.”Način prenosa energije zavisi od hemijske strukture receptora:
1. Pretvara se u molekularnu vibraciju, odnosno nestaje blistavo svjetlo prijenosa energije.(Receptor je gasitelj svjetlosti)
2. Emisija je intenzivnija od samog receptora, što rezultira crvenim pomakom u spektru sekundarne fluorescencije.”(Receptori su emiteri svjetlosti).
Grupa donora (EDANS) i akceptorski gen (DABCYL) su jednolično povezani sa prirodnim supstratom HIV proteaze, a kada supstrat nije odvojen, DABCYL može ugasiti EDANS, a zatim postati nevidljiv za fluor.Nakon prekida veze sa HIV-1 proteazom, EDANS se više ne gasi DABCYL-om, a EDANS luciferaze se mogu naknadno otkriti.Dostupnost inhibitora proteaze može se pratiti promjenama u intenzitetu fluorescencije EDANS-a.
FRET peptidi su pogodni alati za proučavanje nespecifičnosti peptidaze.Budući da se njegov proces reakcije može kontinuirano pratiti, on pruža pogodnu metodu za otkrivanje aktivnosti enzima.Sjaj koji nastaje nakon hidrolize peptidnih veza od strane donora/akceptora daje mjeru aktivnosti enzima pri nanomolarnim koncentracijama.Kada je FRET peptid netaknut, pokazuje iznenadni nestanak unutrašnjeg bljeska, ali kada se bilo koja peptidna veza naspram donora/akceptora prekine, oslobađa se bljesak, koji se može kontinuirano detektirati i aktivnost enzima se tada može kvantificirati.
Vrijeme objave: 14.08.2023