Fret peptidna tehnologija

Rezonanca fluorescencije Transfer energije (FRET)

Rezonanca fluorescencije (Fret) je necitativni proces prenosa energije u kojem se donator uzbuđena državna energija prenosi u akumular uzbuđenu državu putem interakcije intermolekularnih električnih parova. Ovaj proces ne uključuje fotone i stoga je ne-radijacijski. Ovaj test ima prednosti brzog, osjetljivog i jednostavnog.

Boja koja se koristi u testaju Fret može biti identična. Ali u većini primjena zapravo se koriste različite boje. Ukratko, prijenos svjetlosne rezonance energije je prijenos para dipola od donatora (boja 1) u akumulator (DYE 2) kada je uzbuđena donatorska grupa. Općenito, emisijski spektar Grupe donatora fluorofora preklapa se sa apsorpcijskim spektrom grupe za akumulaciju. "Kada je udaljenost između dviju fluorofora prikladna (10 - 100 a), može se primijetiti prijenos fluoroforske energije iz donatora u akumulator." Metoda prenosa energije ovisi o hemijskoj strukturi receptora:

1. Pretvara se u molekularnu vibraciju, odnosno blistavo svjetlo prenosa energije nestaje. (Receptor je lagana gancher)

2. Emisija je intenzivnija od samog receptora, što rezultira crvenim dijelom u sekundarnom fluorescentnom spektru. " (Receptori su blistav emiteri).

Donatorska grupa (Edens) i gen za akumulator (Dabcyl) su jednolično povezane sa prirodnim supstratom HIV protease, a kada se supstrat ne isključuje, Dabcyl može Quenle Edans i potom postati neodređen za fluor. Nakon isključenja protease HIV-1, Edens više ne udara DabCyl, a Emans Luciferases se može naknadno otkriti. Dostupnost inhibitora proteaze može se nadgledati promjenama u intenzitetu fluorescencije Edansa.

Fret peptidi su prikladni alati za proučavanje nepecifičnosti peptidaze. Budući da se njegov proces reakcije može kontinuirano nadgledati, pruža pogodan način otkrivanja enzimske aktivnosti. Sheen proizveden nakon hidrolize peptidnih obveznica od strane donatora / acceptora pruža mjeru enzimske aktivnosti na nanomolarnim koncentracijama. Kad je peptid odbeta netaknut, pokazuje iznenadni nestanak unutarnje bljeskalice, ali kada bilo koja peptidna veza nasuprot donatoru / prihvatljivaču, ona oslobađa bljeskalicu koja se može kontinuirati, a enzim se može kvantificirati.