Rekombinantni proteinski antigeni često imaju nekoliko različitih epitopa, od kojih su neki izdržani i neki su strukturni epitopi. Poliklonalna antitijela dobivena imuniziranjem životinja s denaturiranim antigenima su smjese antitela specifičnih za pojedinačne epitope i mogu se koristiti općenito za otkrivanje prirodnih struktura ili denaturiranih ciljanih proteina. Bočna korist korištenja denaturiranih proteina kao imunogena je da su denaturni proteini imaju tendenciju da budu imunogeničniji i mogu potaknuti snažan imunološki odgovor u životinjama.
Sistem izraza Escherichia COLI obično se bira u antigenske svrhe jer je to najskuplji sistem u pogledu vremena i novca. Da bi se poboljšala mogućnost ciljanog izraza proteina i praktičnosti pročišćavanja, ponekad se izražava samo mali fragment ciljnog proteina, poput određenog domena.
Trodimenzionalna struktura proteina
Specifična domena proteina
Ako je svrha antitijela isključivo za otkrivanje WB-a, ekonomičan je i brz je koristiti sintetički mali peptid kao antigen, ali postoji opasnost od slabe imunogenosti ili neregenike zbog neprimjerenog izbora peptidnog segmenta. Budući da priprema antitela zahtijeva dugo razdoblje, dva ili tri različita peptidna segmenta često su odabrana za pripremu antitijela pomoću polipeptidnog antigena kako bi se osigurala brzina uspjeha eksperimenta.
Čistoća polipeptidnog antigena za imunizaciju dužna je biti veća od 80%. Iako viša čistoća može teoretski dobivanje antitijela sa boljom specifičnošću, u praksi, životinje uvijek proizvode veliki broj nesecifičnih antitijela, čime maskirajući prednosti čistoće antigena.
Pored toga, priprema antitela iz malih peptida mora biti unakrsna povezana sa odgovarajućim nosačem antigena kako bi poboljšao svoju imunogenost. Dva zajednička antigena nosila su KLH i BSA.
Vrijeme objavljivanja: 2025-07-03