Rekombinantni proteinski antigeni često imaju nekoliko različitih epitopa, od kojih su neki epitopi sekvenci, a neki strukturni epitopi.Poliklonska antitijela dobivena imunizacijom životinja denaturiranim antigenima su mješavine antitijela specifičnih za pojedinačne epitope i mogu se općenito koristiti za otkrivanje prirodnih struktura ili denaturiranih ciljnih proteina.Nuspojava korištenja denaturiranih proteina kao imunogena je da su denaturirani proteini skloniji da budu imunogeničniji i da mogu stimulirati snažan imunološki odgovor kod životinja.
Ekspresioni sistem Escherichia coli se obično bira u antigenske svrhe jer je to najskuplji sistem u smislu vremena i novca.Kako bi se poboljšala mogućnost ekspresije ciljnog proteina i pogodnost pročišćavanja, ponekad se eksprimira samo mali fragment ciljnog proteina, kao što je specifična domena.
Trodimenzionalna struktura proteina
Specifična domena proteina
Ako je svrha pripreme antitijela isključivo za detekciju wb, ekonomično je i brzo koristiti sintetički mali peptid kao antigen, ali postoji rizik od slabe imunogenosti ili neregeničnosti zbog neodgovarajućeg odabira peptidnog segmenta.Budući da priprema antitijela zahtijeva dug period, dva ili tri različita peptidna segmenta se često biraju za pripremu antitijela koristeći polipeptidni antigen kako bi se osigurala stopa uspjeha eksperimenta.
Čistoća polipeptidnog antigena za imunizaciju mora biti veća od 80%.Iako veća čistoća teoretski može dobiti antitijela sa boljom specifičnošću, u praksi životinje uvijek proizvode veliki broj nespecifičnih antitijela, maskirajući na taj način prednosti čistoće antigena.
Osim toga, priprema antitijela iz malih peptida mora biti unakrsno povezana sa odgovarajućim antigenom nosača kako bi se poboljšala njegova imunogenost.Dva uobičajena antigena nosioca su KLH i BSA.
Vrijeme objave: Mar-23-2023