Limulus reagens tripeptid je tripeptidna supstanca sa specifičnom sekvencom ekstrahovanom iz lizata krvnih ćelija rakova potkovice ili veštački sintetizovanom. Limulus reagens tripeptid je kromogeni supstrat koji se koristi za kvantitativnu analizu (kao što je test bakterijskog endotoksina) za otkrivanje i mjerenje komponenti gram-negativnih bakterija—endotoksini. Kada na njega djeluju enzimi aktivirani endotoksinima, oslobađa se obojeno jedinjenje (kao što je p-nitroanilin), što omogućava mjerenje intenziteta boje i korelaciju sa sadržajem endotoksina.
Princip rada
Aktivacija endotoksina: U prisustvu endotoksina, amebociti u krvi kraba potkovača oslobađaju enzime, čime se pokreće kaskada koagulacije.
Djelovanje enzima: Aktivirani enzim (obično enzim za zgrušavanje) tada djeluje na hromogeni supstrat.
Hromogena reakcija: Enzim cijepa supstrat, oslobađajući žuto jedinjenje zvano p-nitroanilin (pNA).
Kvantitativna analiza: Intenzitet žute boje je proporcionalan sadržaju endotoksina u uzorku i obično se mjeri pomoću spektrofotometra pri apsorbanciji od 405 nm.
Metode pripreme
Limulus reagens tripeptid se može dobiti kroz dva pristupa u smislu pripreme.
1. Ekstrahovanje prirodnih komponenti iz Limulus krvnih ćelija i dobijanje aktivnog tripeptida kroz odvajanje i prečišćavanje.
2. Upotreba tehnologije sinteze u čvrstoj fazi za sekvencijalno povezivanje specifičnih sekvenci aminokiselina, precizno kontrolirajući strukturu tripeptida.
Zbog politike očuvanja za Limulus (sa provincijama kao što su Zhejiang, Fujian, Guangdong i Guangxi koje ga navode kao "ključno zaštićene vodene divlje životinje u provinciji" / Hong Kong je krajem 2012. izdao propise o zabrani pridnenog povlačenja), i zbog toga što je proces vađenja složen i visok trošak prve metode, relativno je visoka cijena. Stoga se sinteza na čvrstoj fazi sada najčešće koristi. Uzastopnim povezivanjem specifičnih aminokiselinskih sekvenci, struktura tripeptida može se precizno kontrolisati. Ova metoda ne samo da osigurava stabilnost i konzistentnost proizvoda, već i omogućava proizvodnju velikih razmjera, zadovoljavajući potrebe farmaceutske industrije za ispitivanje reagenasa.
Vrijeme objave: 2025-11-04