Pozadina
Melanotan I, takođe poznat kao Afamelanotid, je linearni polipeptid sastavljen od 13 aminokiselina koji je spreman da igra sve značajniju ulogu u farmaceutskim istraživanjima. Primarni engleski nazivi za Melanotan I su Melanotan-1 i Afamelanotide. Kao sintetički analog α-melanocit-stimulirajućeg hormona α-MSH), Melanotan I se može koristiti za liječenje poremećaja fotosenzitivnosti uzrokovanih eritropoetskom protoporfirijom. Trenutno je većina Melanotan I proizvoda označena samo za istraživačku upotrebu i još uvijek nije namijenjena za ljudsku primjenu. U tradicionalnoj sintezi u čvrstoj fazi, izbor smole značajno utiče na efikasnost spajanja i konačnu čistoću proizvoda.
Osnovne informacije
Kineski naziv: Melanotan 1
Engleski naziv: Melanotan-1
Broj kompanije: GT-A006
CAS broj: 75921-69-6
Redoslijed: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Molekularna formula: C78H111N21O19
Molekularna težina: 1646,88
Način pripreme
I. Priprema Fmoc-Val-Amino smole
1. korak:Izvagajte 11,11 g (5 mmol) smole Ramage Amide AM sa stepenom supstitucije od 0,45 mmol/g i dodajte je u reaktor čvrste faze. Dodajte DCM da nabubri smolu 30 minuta, a zatim ocijedite. Operite tri puta sa DMF-om. Dodati rastvor DMF koji sadrži 20% piperidina (v/v) i reagovati 5 minuta. Dodati još 20% rastvora piperidina DMF i reagovati 10 minuta, sa jednim ispiranjem DMF-a između. Nakon što se reakcija završi, ocijedite i isperite tri puta sa DMF-om.
2. korak:Rastvoriti 5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroksibenzotriazol) i 2,32 ml DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimida) u DMF-u na 0°C. Nakon potpunog rastvaranja, dodati smjesu u reakcionu kolonu i reagirati na sobnoj temperaturi 1 sat. Pratite napredak reakcije pomoću ninhidrinskog testa, osiguravajući negativan rezultat. Nakon što se reakcija završi, isprati tri puta sa DMF-om da bi se dobila Fmoc-Val-amino smola.
II. Priprema potpuno zaštićenog smolnog peptida Melanotan I.
1. korak:Dodati 20% piperidina u otopini DMF (volumenski omjer) gornjoj Fmoc-Val-aminosmoli. Reagirajte 5 minuta, zatim dodajte još jednu porciju 20% piperidina u DMF otopini i reagujte 10 minuta. Operite jednom sa DMF tokom intervala. Nakon što se reakcija završi, osušiti pod vakuumom i isprati tri puta sa DMF.
2. korak:Rastvorite 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroksibenzotriazol) i 2,32 ml DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimida) u DMF-u na 0°C. Nakon potpunog rastvaranja, dodati smjesu u reakcionu kolonu i reagirati na sobnoj temperaturi 1 sat. Pratite napredak reakcije pomoću ninhidrinskog testa (Kaiser test) dok se ne dobiju negativni rezultati. Po završetku, isperite tri puta sa DMF-om da biste dobili Fmoc-Pro-Val-aminosmolu.
Korak 3:Prateći metodu opisanu u koraku 2, uzastopno povežite svaku aminokiselinu prema sekvenci Melanotana I. Nakon završetka reakcije spajanja Ac-Ser(tBu)-OH, isperite tri puta sa DMF, tri puta sa DCM (dihlorometanom) i tri puta sa metanolom. Osušite pod vakuumom kako biste dobili 23,89 g potpuno zaštićenog Melanotan I peptida vezanog za smolu.
III. Priprema melanotan I sirovog peptida
23,89 g potpuno zaštićenog Melanotan I peptida vezanog za smolu stavljeno je u tikvicu sa okruglim dnom. Na 0°C, polako je dodato 250 ml prethodno pripremljenog koktela za cijepanje (sastavljenog od TFA:tioanizol:fenol:triizopropilsilan:voda = 82,5:7,5:5:3:2 po zapremini) uz miješanje. Smjesa je reagovala na niskoj temperaturi 0,5 sata, nakon čega je uslijedila reakcija na sobnoj temperaturi 2 sata. Rastvor za cijepanje je zatim filtriran pod vakuumom. Ovaj rastvor se polako dodaje u 2 L ledeno hladnog bezvodnog dietil etra uz mešanje. Sirovi peptid je izolovan filtracijom, ispran tri puta ledeno hladnim dietil etrom i dobijeno je 8,55 g melanotan I sirovog peptida.
IV. Priprema Melanotan I pročišćenog peptida
1. korak:Rastvorite sirovi Melanotan I peptid u 100 ml prečišćene vode i filtrirajte kroz membranu od 0,45 μm da biste dobili sirovi rastvor peptida.
2. korak:Pročistite sirovi Melanotan I peptid pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Koristite DAC-HB50 dinamičku aksijalnu kompresionu kolonu s mobilnom fazom A (0,05% vodeni rastvor trifluorosirćetne kiseline) i mobilnom fazom B (0,05% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu). Izvršite gradijent elucije za odvajanje i prečišćavanje. Otkrijte uzorak pomoću UV detektora i sakupite otopinu peptida koja odgovara ciljanom vrhuncu u frakcijama.
Korak 3:Nakon HPLC prečišćavanja, dobiti 180 ml rastvora Melanotan I trifluoroacetata čistoće veće od 99%. Koncentrirajte otopinu na 50 ml putem rotacijskog isparavanja.
4. korak:Uravnotežite kolonu za hromatografiju dejonizovanom vodom i napunite 50 ml prečišćenog rastvora melanotan I trifluoracetata (čistoća >99%). Eluirati 50 minuta u sistemu vodenog rastvora 2% sirćetne kiseline. Koncentrirajte sakupljeni ciljni proizvod na 80 ml putem rotacijskog isparavanja. Izvršite sušenje pred zamrzavanjem i sušenje zamrzavanjem da biste na kraju dobili 5,33 g Melanotan I prečišćenog peptida, sa prinosom od 32,33%.
Vrijeme objave: 2026-01-05