Pročišćavanje proteina je proces razdvajanja proteinskih frakcija specifične svrhe iz tkiva, ćelija ili proteinskih mješavina. Pročišćavanje proteina ne bi trebalo samo promovirati snažnu čistoću izoliranog proteina, već i održava biološku aktivnost proteina. Stoga je potrebno dizajnirati jednu ili više kombiniranih shema pročišćavanja prema različitim proteinskim svojstvima. Glavna strategija pročišćavanja proteina je iskorištavanje sličnosti i razlike između različitih proteina. Na temelju sličnosti između proteina, ne-proteinski materijal može se ukloniti, a zatim se ciljni protein može odvojiti na osnovu proteinskih razlika. Pogotovo sa brzim razvojem tehnologije genetske inženjerske tehnologije, iako se mnogi proteini izražavaju genetskom rekombinacijom, nivo pročišćavanja proteina izravno se odnosi na čistoću i aktivnosti proteina. Stoga pročišćavanje proteina ostaje važna tema u modernoj biotehnologiji.
Objektivan
S jedne strane, izolacija i pročišćavanje proteina posebno su važni za detaljnu proučavanje strukture i funkcije proteina, a s druge strane, razdvajanje i pročišćavanje proteina također su izravno povezani sa primjenom proteina. Stoga pročišćavanje proteina igra važnu ulogu u istraživanju i primjeni biološke nauke, a tehnologija razdvajanja i pročišćavanja proteina je također ključna tehnologija u biološkoj industriji.
Put
Princip pročišćavanja proteina je odvojiti ciljni protein uz razumnu efikasnost, stopu, prinos i čistoću uz održavanje svoje biološke aktivnosti i hemijskog integriteta. Glavni koraci uključuju odabir eksperimentalnih materijala, obrade, ekstrakcije proteina, klasifikacija sirove proteine, klasifikacija finog proteina i identifikaciju proteina.
Proces pročišćavanja mora obratiti pažnju na: 1 da bi se umanjili utjecaj na proteinsku aktivnost, poput sprečavanja previsokih ili preniskih efekata visoke temperature i teških metala; 2. Radite na niskoj temperaturi; 3 Pokušajte zadržati vodeću razinu sadržaja proteina u uzorku.
Klasifikacija
Pročišćavanje proteina može se klasificirati prema vrsti metode pročišćavanja:
I. Način padavina, uključujući taloženje soli, koristeći soli jone za uništavanje soličnog sloja na površini proteina, izlaganjem hidrofobnog područja, a zatim taloženje za postizanje preliminarnog pročišćavanja; Organski taloženje, koristeći organske otapala za smanjenje vodene aktivnosti, uništava koagulirani film na površini proteina, što dovodi do padavina proteina. Oborine su blagi metod pročišćavanja, ali čistoća nije velika i može se koristiti kao primarni postupak pročišćavanja.
Dvije, metoda dijalize, uključujući dijalizno vrećicu i metodu ultrafiltracije. Dijalizom i ultrafiltracijom mogu se eliminirati male molekularne nečistoće, a rastvor proteina se može zamijeniti i.
3. Kromatografske metode uključuju molekularno sito hromatografiju, hromatografija ionske afinitetne hromatografije (hromatografija metala A / G Chromatografija, supstrat, itd.), Hidrofobna hromatografija, reverzna hromatografija i tečna hromatografija i visoke performanse tečne hromatografije. Da bi se postigli bolji rezultati, često je potrebna kombinacija dvije kromatografske metode, poput hromatografije afiniteta i jonske hromatografije.
Pored gore navedenih metoda, postoje mnoge druge metode pročišćavanja, poput gradijentne centrifugiranja gustoće, pogodne za proizvodnju proteina visokog čistoće, ali zahtijevaju veće eksperimentalne uvjete. Kristali proteina pogodni su za analizu biološke strukture, poput X-prijenosa.
Vrijeme objavljivanja: 2025-07-01